碘化丙啶（Propidium Iodide，简称 PI，CAS：25535-16-4）是一种嵌入性荧光染料，因能特异性结合核酸（DNA/RNA）并产生强荧光信号，被广泛应用于生命科学研究和医学检测领域，是分子生物学、细胞生物学中最常用的探针之一。
基本特性：
化学本质：碘化丙啶是一种含氮杂环化合物（吖啶类衍生物），化学分子式为 C₂₇H₃₄I₂N₄，分子量 668.39。
物理性质：外观为红色粉末，易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，水溶液呈红色；在室温下稳定，需避光保存（荧光易淬灭）。
核心结合特性：以嵌入方式结合双链 DNA 的碱基对之间（优先结合 A-T 碱基对），结合后荧光强度较游离状态增强约 20-30 倍；也可结合 RNA，但结合力弱于 DNA（需用 RNA 酶消化后可特异性检测 DNA）；荧光特性：激发波长约 535nm（适配氩离子激光器），发射波长约 617nm（红色荧光），可被荧光显微镜、流式细胞仪等设备检测。
细胞穿透性：正常活细胞的细胞膜完整且具有选择通透性，碘化丙啶无法穿透；而死细胞、凋亡细胞或细胞膜受损的细胞，碘化丙啶可自由进入细胞内与核酸结合 —— 这是其区分细胞活性的核心依据。
主要用途：
1.细胞凋亡（程序性细胞死亡）检测：
这是 碘化丙啶最经典的用途之一，常与 Annexin V（检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻，早期凋亡标志物）联合使用，实现 “早期凋亡 + 晚期凋亡 + 死细胞” 的精准区分。
2. 细胞周期分析：
碘化丙啶可通过结合 DNA 的量反映细胞内 DNA 含量，进而区分细胞周期的 G0/G1 期、S 期、G2/M 期。
✅G0/G1 期细胞：DNA 为二倍体（2N），结合的碘化丙啶量少，荧光强度低；
✅S 期细胞：DNA 正在复制（2N→4N），结合的碘化丙啶量介于 G0/G1 和 G2/M 之间，荧光强度中等；
✅G2/M 期细胞：DNA 为四倍体（4N），结合的碘化丙啶量多，荧光强度高。
3. 死细胞染色与细胞活性鉴定：
利用碘化丙啶对活细胞的 “拒染性”，快速区分样本中的活细胞与死细胞。原理：活细胞细胞膜完整，碘化丙啶无法进入；死细胞 / 细胞膜受损细胞，碘化丙啶进入后与核酸结合，产生红色荧光。
4. 核酸电泳染色：
碘化丙啶是琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中最常用的核酸染色剂，替代传统的溴化乙锭（EB，毒性更高）。
5. 病原体检测（病毒 / 细菌）：
利用碘化丙啶结合病原体核酸的特性，检测样本中的病毒或细菌。原理：样本经固定破膜后，碘化丙啶进入病原体（病毒、细菌）内结合其核酸，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光信号，实现病原体的定性或定量。
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